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實驗冷凍組織研磨機研磨提取小鼠內(nèi)臟組織提取核酸實驗步驟
冷凍組織研磨機常常在實驗中出現(xiàn),可用范圍廣,耐用程度高,這次研磨主角是-小鼠內(nèi)臟組織,在這里測博用了兩種方式進行實驗操作,下面把詳細(xì)的操作步驟記錄并分享給更多實驗員。
冷凍組織研磨機研磨提取小鼠內(nèi)臟組織方法一:加裂解液直接勻漿
1、取適量組織裝入離心管,組織盡量剪碎成小塊;
2、在離心管中加入氧化鋯珠數(shù)顆(一次性使用);
3、先加入試劑(不建議加入太多,液體體積過大影響勻漿效果),蓋好管蓋,裝入組織研磨機適配器中。
4、組織研磨機研磨參數(shù)設(shè)置為一定轉(zhuǎn)速,研磨時間為2~5min
注意:不同組織研磨時間不同,腦1min,肝臟、脾臟和腎臟2min、肺臟比較難研磨需3~5min,可能更長,中間應(yīng)停頓1~2次防止溫度過高,研磨前最好先用液氮或放置在-80度冰箱預(yù)冷;
5、再加入適量試劑至總體積后按照說明書上進行后續(xù)操作即可;
方法二:先勻漿,再取一定量液體加裂解液進行核酸抽提,適用提取小鼠組織中的病毒的核酸
1、取適量組織裝入離心管,組織盡量剪碎成小塊,樣品量較多時使用大離心管;
2、在離心管中加入氧化鋯珠數(shù)顆,使用大離心管時,可以將氧化鋯珠數(shù)量增加;
3、加入適量的滅菌PBS或生理鹽水,總體積為離心管單管體積的1/3~1/2為好,蓋好管蓋,裝入測博組織研磨機適配器中,安裝上機(研磨前最好先用液氮或放置在-80度冰箱預(yù)冷)。
4、組織研磨機參數(shù)設(shè)置為一定轉(zhuǎn)速,研磨時間為1~5min(不同組織研磨時間不同,腦1min,肝臟、脾臟和腎臟2min、肺臟比較難研磨需3~5min,可能更長,中間應(yīng)停頓1~2次防止溫度過高),若研磨不充分,可以繼續(xù)研磨到充分為止;
5、一定溫度、轉(zhuǎn)速,離心數(shù)分鐘;
6、取上清液按照試劑盒說明書進行后續(xù)提取步驟。方法1中,我們之前試過一齊加1ml的試劑,可能是體積過大,反而勻漿效果不好,所以就改成先加一部分裂解先勻漿,然后再補齊1ml體積進行。
使用后要記得對研磨機進行維護保養(yǎng)操作哦:
1、妥當(dāng)?shù)拇鎯Γ?/strong>如較長時間不使用研磨機器和研磨夾具,應(yīng)將研磨夾具浸在氯乙烷里用超聲波清洗,然后涂上保護油保存在專用工具箱里。
2、清水洗凈:每次研磨完成后,或者要停止研磨一段時間,都應(yīng)將機器上所有的研磨液,用水徹底清洗干凈,否則,殘留的研磨液和研磨水將會變干、變硬或滲到研磨機內(nèi)對機器造成損壞。
3、替換潤滑油:觀察研磨底盤下面的油脂,定期更換與補充新油脂,保護研磨底盤以及研磨底盤的支撐面,不要受異物的污染、撞擊,研磨機正常工作時15-20天應(yīng)對研磨底盤潤滑油進行更換。